ఫైటాస్

ఫైటాస్ యొక్క అప్లికేషన్ మరియు సూత్రం

ఫైటేట్ నుండి ఫాస్ఫేట్ను విడుదల చేసే ఎంజైమ్‌ల కార్యాచరణను గుర్తించడానికి ఈ విధానం ఉపయోగించబడుతుంది. ఆర్థో ఫాస్ఫేట్ మొత్తాన్ని కొలవడం ద్వారా నియంత్రిత పరిస్థితులలో సోడియం ఫైటేట్ యొక్క ఎంజైమాటిక్ జలవిశ్లేషణపై ఈ పరీక్ష ఆధారపడి ఉంటుంది.

కారకాలు మరియు పరిష్కారాలు 
[గమనిక: ఫాస్ఫేట్ లేకపోవడాన్ని నిర్ధారించడానికి అన్ని గాజుసామాను తప్పనిసరిగా యాసిడ్ కడిగి, కడిగి, శుభ్రంగా శుభ్రం చేయాలి.]
ఎసిటేట్ బఫర్ (పిహెచ్ 5.5) 100% ఎసిటిక్ ఆమ్లం (సి 2 హెచ్ 4 ఓ 2), 30.02 గ్రా సోడియం అసిటేట్ ట్రైహైడ్రేట్ (సి 2 హెచ్ 3 ఓ 2 న · 3 హెచ్ 2 ఓ), మరియు 0.147 గ్రా కాల్షియం క్లోరైడ్ డైహైడ్రేట్‌ను 900 ఎంఎల్ నీటిలో కరిగించండి. ద్రావణాన్ని 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌లోకి బదిలీ చేయండి, నీటితో వాల్యూమ్‌తో కరిగించి, కలపాలి. పిహెచ్ 5.50 ± 0.05 ఉండాలి.
సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ 8.40 గ్రా సోడియం ఫైటేట్ డెకాహైడ్రేట్ (C6H6O24P6Na12 · 10H2O) (సిగ్మా కెమికల్ కో.) ను 900 ఎంఎల్ ఎసిటేట్ బఫర్‌లో కరిగించండి. 4 M ఎసిటిక్ ఆమ్లాన్ని జోడించడం ద్వారా 37.0 ° ± 0.1 at వద్ద pH ని 5.50 ± 0.05 కు సర్దుబాటు చేయండి. పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది. పరిమాణాన్ని మిశ్రమాన్ని 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌కు బదిలీ చేయండి, ఎసిటేట్ బఫర్‌తో వాల్యూమ్‌కు పలుచన చేసి, కలపాలి. రోజూ తాజాగా సిద్ధం చేసుకోండి.
నైట్రిక్ యాసిడ్ సొల్యూషన్ (27%) గందరగోళాన్ని చేస్తున్నప్పుడు, నెమ్మదిగా 70 ఎంఎల్ 65% నైట్రిక్ యాసిడ్ 130 ఎంఎల్ నీటిలో కలపండి.
అమ్మోనియం హెప్టామోలిబ్డేట్ సొల్యూషన్ 100 గ్రాముల అమ్మోనియం హెప్టామోలిబ్డేట్ టెట్రాహైడ్రేట్ [(NH4) 6Mo7O24 · 4H2O] ను 900 ఎంఎల్ నీటిలో 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌లో కరిగించండి. 25% అమ్మోనియా ద్రావణంలో 10 ఎంఎల్ వేసి, నీటితో వాల్యూమ్‌కు పలుచన చేసి, కలపాలి. పరిసర ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేసి, కాంతి నుండి కవచం చేసినప్పుడు ఈ పరిష్కారం 4 వారాల పాటు స్థిరంగా ఉంటుంది.
అమ్మోనియం వనాడేట్ సొల్యూషన్ 2.35 గ్రా అమ్మోనియం మోనోవానాడేట్ (NH4VO3) ను 400 ఎంఎల్ వెచ్చని (60 °) నీటిలో కరిగించండి. గందరగోళాన్ని చేస్తున్నప్పుడు, నెమ్మదిగా 20 ఎంఎల్ నైట్రిక్ యాసిడ్ సొల్యూషన్ (27%) జోడించండి. పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది. పరిమాణాన్ని మిశ్రమాన్ని 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌కు బదిలీ చేయండి, నీటితో వాల్యూమ్‌కు పలుచన చేసి, కలపాలి. పరిసర ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేసి, కాంతి నుండి కవచం చేసినప్పుడు ఈ పరిష్కారం 4 వారాల పాటు స్థిరంగా ఉంటుంది.
రంగు / ఆపు పరిష్కారం గందరగోళాన్ని చేస్తున్నప్పుడు, 250 ఎంఎల్ అమ్మోనియం వనాడేట్ సొల్యూషన్‌ను 250 ఎంఎల్ అమ్మోనియం హెప్టామోలిబ్డేట్ సొల్యూషన్‌కు జోడించండి. నెమ్మదిగా 65% నైట్రిక్ ఆమ్లంలో 165 mL జోడించండి. పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది. పరిమాణాన్ని మిశ్రమాన్ని 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌కు బదిలీ చేయండి, నీటితో వాల్యూమ్‌కు పలుచన చేసి, కలపాలి. రోజూ తాజాగా సిద్ధం చేసుకోండి.
పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ సొల్యూషన్ ఒక వాక్యూమ్ ఓవెన్లో తగినంత పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ (KH2PO4) ను 100 ° నుండి 104 at వద్ద 2 గంటలకు ఆరబెట్టండి. ఎండిన సిలికా జెల్ మీద డీసికేటర్‌లో పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది.
నకిలీ (పరిష్కారాలు A మరియు B) లో, సుమారు 0.245 గ్రాముల ఎండిన పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ 1 మి.గ్రా లోపల ఖచ్చితంగా బరువు ఉండాలి మరియు 1.80 mmol / L పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ కలిగిన పరిష్కారాలను పొందటానికి ఎసిటేట్ బఫర్‌తో 1 L కు కరిగించాలి.
ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ ప్రిపరేషన్ (అధిక సాంద్రీకృత ఫైటాస్ తయారీ) ఈ తయారీని జిస్ట్-బ్రోకేడ్స్, డెల్ఫ్ట్, నెదర్లాండ్స్ నుండి కేటాయించిన కార్యాచరణతో (సహకార పరీక్ష ద్వారా) పొందవచ్చు, లేదా రిఫరెన్స్ తయారీ యొక్క కార్యాచరణను విధానం 2 ప్రకారం నిర్ణయించవచ్చు.
ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ సొల్యూషన్స్, ప్రొసీజర్ 1 200-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌లలో డూప్లికేట్‌లో 1 మి.గ్రా లోపల కచ్చితంగా 20,000 ఫైటాస్ యూనిట్లతో సమానమైన ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ తయారీ బరువు. ఎసిటేట్ బఫర్‌తో కరిగించి వాల్యూమ్‌లో కరిగించి, కలపాలి. తుది పలుచన యొక్క 2.0 ఎంఎల్‌కు సుమారు 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, మరియు 0.08 ఫైటాస్ యూనిట్లను కలిగి ఉన్న పలుచనలను పొందటానికి ఎసిటేట్ బఫర్‌తో కరిగించండి.
నమూనా తయారీ, విధానం 1 ఎసిటేట్ బఫర్‌లో ఖచ్చితంగా బరువున్న మాదిరిని సస్పెండ్ చేయండి లేదా కరిగించండి మరియు కరిగించాలి, తద్వారా 2.0 ఎంఎల్ తుది పలుచన 0.02 మరియు 0.08 ఫైటాస్ యూనిట్ల మధ్య ఉంటుంది.

నమూనా తయారీ, విధానం 2 నకిలీలో, ఫైటేస్ రిఫరెన్స్ తయారీ మొత్తాలను ఖచ్చితంగా బరువుగా ఉంచండి మరియు తుది పలుచన యొక్క 2.0 ఎంఎల్‌కు 0.06 ± 0.006 ఫైటాస్ యూనిట్లను కలిగి ఉన్న పలుచనలను పొందటానికి ఎసిటేట్ బఫర్‌లో కరిగించి పలుచన చేయాలి.

విధానాలు
విధానం 1 (ఫైటాస్ కార్యకలాపాల నిర్ధారణ) నమూనా తయారీ, విధానం 1, మరియు ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ సొల్యూషన్స్, ప్రొసీజర్ 1 యొక్క 2.00 ఎంఎల్‌ను ప్రత్యేక 20- × 150-మిమీ గాజు పరీక్ష గొట్టాలుగా బదిలీ చేయండి. స్టాప్‌వాచ్‌ను ఉపయోగించడం మరియు సమయానికి ప్రారంభించడం సున్నాకి సమానం, సిరీస్ క్రమంలో మరియు క్రమ సమయ వ్యవధిలో, గొట్టాలను 37.0 ± ± 0.1 ° నీటి స్నానంలో ఉంచండి మరియు వాటి విషయాలను 5 నిమిషాలు సమతుల్యం చేయడానికి అనుమతించండి. సమయం 5 నిమిషాలకు సమానం, సిరీస్ యొక్క అదే క్రమంలో మరియు అదే సమయ వ్యవధిలో, ప్రతి టెస్ట్ ట్యూబ్‌కు 4.0 ఎంఎల్ సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ (గతంలో 37.00 ± 0.10 కు సమతౌల్యం) జోడించండి. 37.0 ± ± 0.1 ° నీటి స్నానంలో కలపండి మరియు భర్తీ చేయండి. సమయం 65 నిమిషాలకు సమానం, అదే క్రమంలో మరియు అదే సమయ వ్యవధిలో, 4.0 ఎంఎల్ కలర్ / స్టాప్ సొల్యూషన్‌ను జోడించడం ద్వారా పొదిగేదాన్ని ముగించండి. కలపండి మరియు పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది.
నమూనా తయారీ, విధానం 1, మరియు ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ సొల్యూషన్స్, ప్రొసీజర్ 1 యొక్క 2.00 ఎంఎల్‌ను ప్రత్యేక 20- × 150-మిమీ గ్లాస్ టెస్ట్ ట్యూబ్‌లకు బదిలీ చేయడం ద్వారా ఖాళీలను సిద్ధం చేయండి. స్టాప్‌వాచ్‌ను ఉపయోగించడం మరియు సమయానికి ప్రారంభించడం సున్నాకి సమానం, సిరీస్ క్రమంలో మరియు క్రమ సమయ వ్యవధిలో, గొట్టాలను 37.0 ± ± 0.1 ° నీటి స్నానంలో ఉంచండి మరియు వాటిని 5 నిమిషాలు సమతుల్యం చేయడానికి అనుమతించండి. 5 నిమిషాల సమాన సమయంలో, సిరీస్ యొక్క అదే క్రమంలో మరియు అదే సమయ వ్యవధిలో, 4.0 mL కలర్ / స్టాప్ సొల్యూషన్‌ను జోడించండి. కలపండి మరియు పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది. తరువాత ఖాళీ గొట్టాలకు 4.00 ఎంఎల్ సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ వేసి కలపాలి.
3000 × g వద్ద 5 నిమిషాలు అన్ని పరీక్ష గొట్టాలను సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి. 1-సెం.మీ పాత్-లెంగ్త్ సెల్‌లో 415 nm వద్ద తగిన స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌తో ప్రతి ద్రావణాన్ని గ్రహించడం, పరికరాన్ని సున్నా చేయడానికి నీటిని ఉపయోగించడం.
విధానం 2 (ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ తయారీ యొక్క ఫైటాస్ కార్యాచరణను నిర్ణయించడం) 2.00 ఎంఎల్ నమూనా తయారీ, విధానం 2, మరియు 2.00 ఎంఎల్ (పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ సొల్యూషన్ A నుండి మూడు సార్లు మరియు బి నుండి రెండు సార్లు) పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ సొల్యూషన్స్ ప్రత్యేక 20 లోకి బదిలీ చేయండి - × 150-మిమీ గాజు పరీక్ష గొట్టాలు. స్టాప్‌వాచ్‌ను ఉపయోగించడం మరియు సమయానికి ప్రారంభించడం సున్నాకి సమానం, సిరీస్ క్రమంలో మరియు క్రమ సమయ వ్యవధిలో, గొట్టాలను 37.0 ± ± 0.1 ° నీటి స్నానంలో ఉంచండి మరియు వాటి విషయాలను 5 నిమిషాలు సమతుల్యం చేయడానికి అనుమతించండి. సమయం 5 నిమిషాలకు సమానం, సిరీస్ యొక్క అదే క్రమంలో మరియు అదే సమయ వ్యవధిలో, పరీక్షా గొట్టాలకు 4.0 mL సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్‌ను (గతంలో 37.0 ± ± 0.1 to కు సమతౌల్యం) జోడించండి. 37.0 ± ± 0.1 ° నీటి స్నానంలో కలపండి మరియు భర్తీ చేయండి. సమయం 35 నిమిషాలకు సమానం, అదే క్రమంలో మరియు అదే సమయ వ్యవధిలో, 4.0 ఎంఎల్ కలర్ / స్టాప్ సొల్యూషన్‌ను జోడించడం ద్వారా పొదిగేదాన్ని ముగించండి. కలపండి మరియు పరిసర ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరుస్తుంది.

2.00 ఎంఎల్ నమూనా తయారీ, విధానం 2 ను ప్రత్యేక 20- × 150-మిమీ గాజు పరీక్ష గొట్టాలుగా బదిలీ చేయడం ద్వారా ఖాళీలను సిద్ధం చేయండి. ఐదు వేర్వేరు 20- × 150-మిమీ గాజు పరీక్ష గొట్టాల శ్రేణిలోకి 2.00 ఎంఎల్ నీటిని బదిలీ చేయడం ద్వారా రీజెంట్ ఖాళీలను సిద్ధం చేయండి. అన్ని ఖాళీ గొట్టాలకు 4.0 ఎంఎల్ కలర్ / స్టాప్ సొల్యూషన్ వేసి కలపాలి. తరువాత 4.0 ఎంఎల్ సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ వేసి కలపాలి. 1-సెం.మీ పాత్-లెంగ్త్ సెల్‌లో 415 nm వద్ద తగిన స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌తో ప్రతి ద్రావణాన్ని గ్రహించడం, పరికరాన్ని సున్నా చేయడానికి నీటిని ఉపయోగించడం.

లెక్కలు
లెక్కింపు, విధానం 1 వన్ ఫైటాస్ (ఫైటాస్) యూనిట్ (ఎఫ్‌టియు) అనేది పరీక్ష పరిస్థితులలో పిహెచ్ 5.50 వద్ద 37.00 వద్ద సోడియం ఫైటేట్ 0.0051 మోల్ / ఎల్ నుండి 1 atmol / min నుండి అకర్బన ఫాస్ఫేట్‌ను విముక్తి చేసే ఎంజైమ్. ప్రతి నమూనా తయారీ మరియు ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ సొల్యూషన్ కోసం సరిదిద్దబడిన శోషణ (నమూనా మైనస్ ఖాళీ) ను లెక్కించండి. ప్రతి ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ సొల్యూషన్ యొక్క ఖచ్చితంగా లెక్కించిన ఫైటాస్ కార్యాచరణను (2 ఎంఎల్‌కు ఎఫ్‌టియు) సంబంధిత శోషణకు వ్యతిరేకంగా ప్లాట్ చేయండి. వక్రరేఖ నుండి, ప్రతి నమూనా తయారీలో ఫైటాస్ కార్యాచరణను నిర్ణయించండి (2 mL కి FTU):

కార్యాచరణ (FTU / g) = (FTU per 2 mL × dilution) / నమూనా బరువు (g).


లెక్కింపు, విధానం 2 ప్రతి నమూనా తయారీకి (శోషక ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ సొల్యూషన్ మైనస్ సంబంధిత శోషణ ఖాళీ) మరియు ప్రతి పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ సొల్యూషన్, ఎపి (శోషణ పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ సొల్యూషన్ మైనస్ సగటు శోషణ రియాజెంట్ ఖాళీ) కోసం సరిదిద్దబడిన శోషక AR ను లెక్కించండి. ప్రతి పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ పరిష్కారం యొక్క ఫాస్ఫేట్ గా ration త C ని లెక్కించండి:

(W × 1000 × 2) / MW = C (mmol / 2 mL).

పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ బరువును సరిదిద్దిన తరువాత ప్రతి పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ ద్రావణానికి శోషక D ని లెక్కించండి:

Ap / C = D (2 mL కి శోషక యూనిట్లు / ఫాస్ఫేట్ యొక్క mmol).

ఫలితాల సగటును లెక్కించండి, E (గరిష్ట అనుమతించదగిన వ్యత్యాసం, 5%) ఇస్తుంది.
ప్రతి ఫైటాస్ రిఫరెన్స్ తయారీ కోసం కార్యాచరణను లెక్కించండి:

(AR × f) / (30 × R × E) = FTU / g,

దీనిలో AR ఫైటాస్ స్టాండర్డ్ సొల్యూషన్ యొక్క సరిదిద్దబడిన శోషణకు సమానం; f సూచన తయారీ యొక్క మొత్తం పలుచన కారకానికి సమానం; 30 పొదిగే సమయానికి సమానం, నిమిషంలో; R, మాదిరి బరువుకు సమానం; E కారకాల సగటుకు సమానం; W లో పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ బరువుకు సమానం; మరియు MW పొటాషియం డైహైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్, 136.09 (గ్రా / మోల్) యొక్క పరమాణు బరువుకు సమానం.

విశ్లేషణ యొక్క సర్టిఫికెట్

ప్యాకేజింగ్ మరియు నిల్వ

సాలిడ్ ఫుడ్ ప్యాకేజింగ్ బ్యాగ్, 25 కిలోలు / బ్యారెల్.

ఫైటాస్ ఎండ, వేడి నుండి దూరంగా పొడి, చల్లని మరియు బాగా వెంటిలేషన్ ప్రదేశాలలో నిల్వ చేయాలి.

చెల్లింపు:టి / టి, పేపాల్, వెస్ట్రన్ యూనియన్, అలీబాబా ట్రేడ్ అస్యూరెన్స్, వీసా, మాస్టర్ కార్డ్, ఇ-చెకింగ్, తరువాత చెల్లించండి, ఎల్‌సి మరియు మొదలైనవి.