పెప్టిడేస్

b. Take 1.00mL of each of the above personnel (parallel test is required), add 5.00mL of 0.4mol / L sodium carbonate solution, 1.00mL of Folin reagent use solution, place in a 40 ± 0.2 ℃ water bath for 20min, and take it out. Use a spectrophotometer at a wavelength of 680nm and 10mm cuvette. Take the "0" tube containing no tyrosine as blanks, and measure the absorbance respectively. Take the absorbance A as the ordinate and the tyrosine concentration c as the abscissa. , Draw a standard curve (this curve should pass the zero point).

According to the plot or the regression equation, the amount of tyrosine (ug) when the absorbance is 1 is calculated, which is the absorbance constant K value. Its K value should be in the range of 95-100.

2 Determination
(1) Preparation of Peptidase
a. Weigh 1~2g of enzyme powder, accurate to 0.0002g (or absorb 1.00mL of liquid enzyme), dissolve with a small amount of pH6.0 buffer solution, and grind it with a glass rod, then carefully pour the supernatant into a volumetric flask. Add a small amount of the above-mentioned buffer solution to the sediment to dissolve it, and grind it for 3 to 4 times, and finally transfer it all into a volumetric flask, make up to volume with the buffer solution, and shake well. Filter through four layers of gauze, and the filtrate is once again diluted to the appropriate concentration with a buffer according to the enzyme activity for measurement (diluted to the measured absorbance within the range of 0.25 to 0.40).
b. For the determination of enzyme powder, refer to Table A4 for the dilution factor (liquid enzyme can also refer to Table A4 for dilution).

(2) Measurement

a. First put the casein solution into a 40 ± 0.2 ℃ constant temperature water bath and preheat for 5min.
b. Follow the procedure below:
Test tube A (blank)
→ Add 1.00mL of enzyme solution (40 ± 0.2 ℃)
→ Add 2.00mL of trichloroacetic acid (shake well) (40 ± 0.2 ℃)
→ Add casein 1.00mL (shake well)
→ Take it out for 10 minutes and filter
→ take 1.00mL filtrate
→ Add sodium carbonate solution 5.00mL
→ 1.00 mL of Jiafulin reagent solution (40 ± 0.2 ℃, color development 20min)
→ At a wavelength of 680nm, measure its absorbance with a 10mm cuvette

Test tube B (enzyme sample, three parallel samples are required)
→ Add 1.00mL of enzyme solution (40 ± 0.2 ℃)
→ Add casein 1.00mL (shake well, react at 40 ± 0.2 ℃ for 10min)
→ Add 2.00mL of trichloroacetic acid (shake well)
→ Take it out for 10 minutes and filter
→ take 1.00mL filtrate
→ Add sodium carbonate solution 5.00mL
→ 1.00 mL of Jiafulin reagent solution (40 ± 0.2 ℃, color development 20min)
→ At a wavelength of 680nm, measure its absorbance with a 10mm cuvette

Calculation
X = A × K × 4/10 × n = 2/5 × A × K × n
In the formula:
X ---- enzyme activity of the sample, u / g (u / mL);
A ---- The average absorbance of the sample in parallel test;
K ---- absorption constant;
4 ---- the total volume of the reaction;
10 --- reaction time 10min, calculated as 1min;
n ---- Dilution multiple.

The result obtained is expressed as an integer.

The allowable difference between the results of parallel tests shall not exceed 3%.

CERTIFICATE OF ANALYSIS 

పెప్టిడేస్ యొక్క నిర్వచనం

1g ఎంజైమ్ పౌడర్ (లేదా 1 ఎంఎల్ లిక్విడ్ ఎంజైమ్), 40 „„ ƒ, పిహెచ్ 6.0 వద్ద, 1 మిన్ హైడ్రోలైజెస్ కేసైన్ 1 యు టైరోసిన్ ను ఎంజైమ్ యాక్టివిటీ యూనిట్‌గా యు / జి (యు / ఎంఎల్) లో ఉత్పత్తి చేస్తుంది.

ఫోరింట్ పద్ధతి

యొక్క సూత్రంపెప్టిడేస్
పెప్టిడేస్ hydrolyzes casein substrates at 40 ° C and pH 6.0 to produce amino acids containing phenolic groups. Under alkaline conditions, Folin reagent is reduced to form molybdenum blue and tungsten blue. Measure with spectrophotometer and calculate. Its enzyme activity.

కారకాలు మరియు పరిష్కారాలు
1 Preparation of పెప్టిడేస్
2000 ఎంఎల్ మిల్లు-నోటి రిఫ్లో పరికరంలో, 100 గ్రా సోడియం టంగ్స్టేట్ (Na2WO4 · 2H2O), 25 గ్రా సోడియం మాలిబ్డేట్ (Na2MOO4 · 2H2O), 700 ఎంఎల్ నీరు, 50 ఎంఎల్ 85% ఫాస్పోరిక్ ఆమ్లం, 100 ఎంఎల్ సాంద్రీకృతము హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లం, 10 హెచ్‌కి తక్కువ వేడి మీద ఉడకబెట్టండి, రిఫ్లక్స్ కూలర్‌ను తొలగించండి ఒక ఫ్యూమ్ హుడ్‌లో, 50 గ్రా లిథియం సల్ఫేట్ (లిసో 4), 50 ఎంఎల్ నీరు మరియు కొన్ని చుక్కల సాంద్రీకృత బ్రోమిన్ నీరు (99%) వేసి, మరిగించండి అదనపు బ్రోమిన్ను తొలగించడానికి 15 నిమిషాలు (శీతలీకరణ తర్వాత ఆకుపచ్చ బ్రోమిన్ నీరు వేసి కొద్దిగా ఉడకబెట్టండి) అదనపు బ్రోమిన్ను తొలగించండి), చల్లబరుస్తుంది, వాల్యూమ్‌కు 1000 ఎంఎల్‌కు నీరు వేసి, బాగా కలపండి మరియు ఫిల్టర్ చేయండి. కారకాలు బంగారు పసుపు రంగులో ఉండాలి మరియు గోధుమ సీసాలలో నిల్వ చేయాలి.
ద్రావణాన్ని వాడండి: ఫులిన్ రియాజెంట్ యొక్క ఒక భాగాన్ని రెండు భాగాల నీటితో కలపండి మరియు బాగా కదిలించండి.
2 సోడియం కార్బోనేట్ ద్రావణం c (Na2CO3) = 0.4mol / L.
42.4 గ్రా అన్‌హైడ్రస్ సోడియం కార్బోనేట్ తీసుకొని, నీటిలో కరిగించి 1000 ఎంఎల్ వరకు తయారుచేయండి.
3 ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ ఆమ్లం సి (CCL3 · COOH) = 0.4mol / L.
65.4 గ్రా ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ ఆమ్లం తీసుకొని, నీటిలో కరిగించి 1000 ఎంఎల్ వరకు తయారు చేయండి.
4 సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ ద్రావణం సి = 0.5 మోల్ / ఎల్
జిబి 601 ప్రకారం తయారుచేస్తారు.
5 హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లం ద్రావణం c = 1mol / L మరియు 0.1mil / L.
జిబి 601: 90 ఎంఎల్ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లాన్ని కొలవండి, 1000 ఎంఎల్ నీటిలో పోయాలి మరియు 1 మోల్ / ఎల్ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లాన్ని పొందటానికి కదిలించండి.
9 ఎంఎల్ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లాన్ని కొలవండి, దానిని 1000 ఎంఎల్ నీటిలో పోసి, 0.1 మోల్ / ఎల్ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లాన్ని పొందటానికి కదిలించండి.
6 బఫర్ పరిష్కారం
రుచి ప్రోటీసెస్ కోసం ఫాస్ఫేట్ బఫర్ (pH = 6.0)
45.23 గ్రాముల డిసోడియం హైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ (Na2HPO4 · 12H2O) మరియు 8.07 గ్రా సిట్రిక్ యాసిడ్ (C6H6O7 · H2O), నీటిలో కరిగి 1000 ఎంఎల్ వరకు తయారవుతుంది. తయారీ తరువాత, దాన్ని సరిచేయడానికి పిహెచ్ మీటర్ ఉపయోగించండి.
7 10 గ్రా / ఎల్ కేసైన్ (కేసిన్) పరిష్కారం
1.000 గ్రా బరువు గల కేసిన్, 0.001 గ్రాముల వరకు ఖచ్చితమైనది, 0.5 మోల్ / ఎల్ సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ ద్రావణంతో తడి, 80 ఎంఎల్ పిహెచ్ 6.0 బఫర్ వేసి, పూర్తిగా కరిగిపోయే వరకు వేడినీటి స్నానంలో వేడి చేసేటప్పుడు కదిలించు. , 100 ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌కు బదిలీ చేయండి మరియు పిహెచ్ 6.0 బఫర్‌తో గుర్తుకు పలుచన చేయాలి. ఈ పరిష్కారం 3 రోజుల పాటు రిఫ్రిజిరేటర్‌లో నిల్వ చేయబడుతుంది.
8 100ug / mLL- టైరోసిన్ ప్రామాణిక పరిష్కారం
a. 0.1 ° గ్రా ఎల్-టైరోసిన్ 105 ° C వద్ద స్థిరమైన బరువుకు ఎండబెట్టి, 0.0002 గ్రాముల వరకు ఖచ్చితమైనది, మరియు 1 ఎంఎల్ / ఎల్ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లంలో 60 ఎంఎల్‌తో కరిగించి 100 ఎంఎల్ వరకు తయారవుతుంది.
బి. 1 mg / mL టైరోసిన్ ప్రామాణిక ద్రావణంలో పైపెట్ 10.00 mL మరియు 100 ug / mLL- టైరోసిన్ ప్రామాణిక ద్రావణాన్ని పొందడానికి 0.1 mol / L హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లంతో 100 mL వరకు తయారు చేయండి.

Instruments and equipment Of పెప్టిడేస్
1 స్థిరమైన ఉష్ణోగ్రత నీటి స్నానం: 40 ± 0.2 â „
2 స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్: జిబి 9721 యొక్క అవసరాలను తీర్చాలి

Analysis steps Of పెప్టిడేస్
1 ప్రామాణిక వక్రరేఖ యొక్క డ్రాయింగ్
a. ఎల్-టైరోసిన్ ప్రామాణిక పరిష్కారం. టేబుల్ A3 ప్రకారం తయారు చేయబడింది

టేబుల్ A3

ప్యాకేజింగ్ మరియు నిల్వ

సాలిడ్ ఫుడ్ ప్యాకేజింగ్ బ్యాగ్, 25 కిలోలు / బ్యారెల్.

పెప్టిడేస్ should be sపొడి, చల్లని మరియు బాగా వెంటిలేషన్ ప్రదేశాలలో ఎండ నుండి దూరంగా, వేడి.

చెల్లింపు:టి / టి, పేపాల్, వెస్ట్రన్ యూనియన్, అలీబాబా ట్రేడ్ అస్యూరెన్స్, వీసా, మాస్టర్ కార్డ్, ఇ-చెకింగ్, తరువాత చెల్లించండి, ఎల్‌సి మరియు మొదలైనవి.