నాటోకినేస్

ప్రిన్సిపల్

నాటోకినేస్ ఫైబ్రిన్‌పై పనిచేస్తుంది, పెప్టైడ్ అనుసంధానం విచ్ఛిన్నం చేస్తుంది మరియు తక్కువ మాలిక్యులర్ బరువు ఆమ్లం కరిగే ఉత్పత్తులను ఏర్పరుస్తుంది, వీటిని స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ ద్వారా కొలుస్తారు.

ఒక ఫైబ్రినోలిటిక్ యాక్టివిటీ యూనిట్ (ఎఫ్‌యు) ఎంజైమ్ మొత్తంగా నిర్వచించబడింది, ఇది ప్రక్రియలో పేర్కొన్న పరిస్థితులలో 275nm వద్ద ఫిల్ట్రేట్ యొక్క శోషణను నిమిషానికి 0.01 పెంచుతుంది.

నాటోకినేస్ యొక్క కారకాలు
1.0.05 ఎమ్ బోరేట్ బఫర్ (పిహెచ్ 8.5) - 9.54 గ్రా సోడియం బోరేట్ (Na2B4O710H2O) మరియు 4.5 గ్రా సోడియం క్లోరైడ్ (NaCl) ను 200 మి.లీ DI నీటిలో కరిగించండి. 1N HCl తో pH ని 8.5 కు సర్దుబాటు చేయండి మరియు 500 ml తయారు చేయడానికి DI నీటిని జోడించండి.
2.0.2 ఎన్ టిసిఎ - 250 మి.లీ తయారీకి 8.17 గ్రా ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ యాసిడ్ (సిసిఎల్ 3 కో 2 హెచ్) ను డిఐ నీటిలో కరిగించండి.
3.థ్రాంబిన్ సొల్యూషన్ - ఒక సిరంజిని ఉపయోగించి, త్రోంబిన్ బాటిల్ (సిగ్మా, టి -6634) లో 5.0 మి.లీ 0.05 ఎమ్ బోరేట్ బఫర్ ఇంజెక్ట్ చేయండి. పూర్తిగా కరిగిపోయేలా మెత్తగా కదిలించు. సిరంజితో, 1 మి.లీ ఆల్కాట్‌లను ప్లాస్టిక్ కుండలుగా (100 యూనిట్లు / సీసా) బదిలీ చేసి, నిల్వ చేయడానికి వాటిని స్తంభింపజేయండి.
* ఉపయోగం సమయంలో ఒక సీసా యొక్క కంటెంట్‌ను 0.05 M బోరేట్ బఫర్ యొక్క 4 మి.లీకి పలుచన చేసి, 20 U / ml తుది సాంద్రతను పొందడానికి పైప్‌టేటర్ చిట్కాతో కలపండి (పరీక్షను నిర్వహించినప్పుడు ఇదే చిట్కాను ఉపయోగించండి). ఇది పూర్తిగా కరిగిపోయిందని నిర్ధారించుకోండి.

4.అసిటేట్ సొల్యూషన్ (పిహెచ్ 6.0) - డిఐ నీటిలో 12.96 గ్రా సోడియం అసిటేట్, అన్‌హైడ్రస్ (సిహెచ్ 3 కో 2 ఎన్ఎ) కరిగించి, 2 ఎన్ ఎసిటిక్ యాసిడ్ ద్రావణంలో 2.38 మి.లీ వేసి, 100 మి.లీ.ని డిఐ నీటితో కరిగించాలి.

10% ట్రిటాన్ ఎక్స్ -100 - డిఐ నీటిలో 5.0 గ్రా ట్రిటాన్ ఎక్స్ -100 (టి-ఆక్టిల్‌ఫెనాక్సిపోలిఎథాక్సైథనాల్) ను వేడితో కరిగించి, డిఐ నీటిని 50 మి.లీ. గోధుమ సీసాలో నిల్వ చేయండి.

. 1 లీటర్.

6. ఫైబ్రినోజెన్ సబ్‌స్ట్రేట్ - 0.05 M బోరేట్ బఫర్‌లో 10.0 మి.లీ 96.0 మి.గ్రా ఫైబ్రినోజెన్ (సిగ్మా, ఫ్రేక్షన్ I టైప్ I-S, F8630) ను కొద్దిగా కొద్దిగా కదిలించు, మరియు 50 ఎంఎల్ బీకర్‌లో పూర్తిగా కరిగించండి. ప్రతిరోజూ తాజాగా సిద్ధం చేయండి (* 1)

                                                                 

నమూనా పరిష్కారం తయారీ
0.04 మరియు 0.08 మధ్య ఫిల్ట్రేట్ యొక్క సరిదిద్దబడిన శోషణ (∠† A) ఇవ్వడానికి ఎంజైమ్ డైలుయెంట్‌తో నమూనాను కరిగించండి ఏకాగ్రత సాధారణంగా 0.67 నుండి 1.33 FU / ml

నాటోకినేస్ యొక్క విధానము

1.పోరేట్ 1.4 మి.లీ బోరేట్ బఫర్ మరియు 0.4 మి.లీ ఫైబ్రినోజెన్ సబ్‌స్ట్రేట్ ద్రావణాన్ని తగిన సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్, సుడిగుండం మరియు 37ºC నీటి స్నానంలో 5 నిమిషాలు పొదిగించండి.
2. సరిగ్గా 0.1 మి.లీ త్రోంబిన్ సొల్యూషన్‌ను జోడించి, సుడిగుండంపై సరిగ్గా కలపండి.
3. సరిగ్గా 10 నిమిషాల తరువాత, ఎంజైమ్ నమూనా ద్రావణంలో 0.1 మి.లీ వేసి, 5 సెకన్ల పాటు కలపండి మరియు 37ºC వద్ద పొదిగేది.
4. ప్రతిచర్య ప్రారంభమైన సమయం నుండి 20 మరియు 40 నిమిషాల తరువాత, వరుసగా 5 సెకన్ల పాటు కలపండి.
5. సరిగ్గా 60 నిమిషాల తరువాత, ప్రతిచర్యను ఆపడానికి 2 మి.లీ టిసిఎ ద్రావణాన్ని జోడించి, 37ºC వద్ద 20 నిమిషాలు కలపాలి.
6. 15 నిమిషాలు 5,000 ఆర్‌పిఎమ్ వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్.

పాశ్చర్ పైపెట్‌తో QUARTZ క్యూట్‌లోకి 1 మి.లీ సూపర్‌నాటెంట్‌ను జాగ్రత్తగా పైప్ చేయండి మరియు 275 ఎన్ఎమ్‌ల వద్ద శోషణ (అస్) చదవండి.

BLANK
1. పిరేట్ 1.4 మి.లీ బోరేట్ బఫర్ మరియు 0.4 మి.లీ ఫైబ్రినోజెన్ సబ్‌స్ట్రేట్ ద్రావణాన్ని సెంట్రిఫ్యూజ్డ్ టెస్ట్ ట్యూబ్‌లోకి, మరియు 37ºC నీటి స్నానంలో 5 నిమిషాలు పొదిగించండి.
2. సరిగ్గా 0.1 మి.లీ త్రోంబిన్ ద్రావణం మరియు సుడిగుండం జోడించండి.
3. సరిగ్గా 10 నిమిషాల తరువాత, 2 మి.లీ టిసిఎ ద్రావణాన్ని వేసి 5 సెకన్ల పాటు కలపండి.
4. 0.1 మి.లీ మాదిరిని ద్రావణంలో చేర్చండి, 5 సెకన్ల పాటు కలపండి మరియు 37ºC వద్ద సరిగ్గా 20 నిమిషాలు పొదిగించండి.
5. 5,000 ఆర్‌పిఎమ్ వద్ద 15 నిమిషాలు సెంట్రిఫ్యూజ్.
పాశ్చర్ పైపెట్‌తో QUARTZ క్యూట్‌లోకి 1 మి.లీ సూపర్‌నాటెంట్‌ను జాగ్రత్తగా పైపెట్ చేయండి మరియు (అబ్) 275 ఎన్ఎమ్ వద్ద శోషణను చదవండి. (* 2)

లెక్కింపు
(అస్ - అబ్) 1 1
FU / g = _____________ x ________ x _______ x D.
0.01 60 0.1

D = పలుచన కారకం (1 / బరువు (g / mL))

విశ్లేషణ యొక్క సర్టిఫికెట్

ప్యాకేజింగ్ మరియు నిల్వ

సాలిడ్ ఫుడ్ ప్యాకేజింగ్ బ్యాగ్, 25 కిలోలు / బ్యారెల్.

నాటోకినేస్ ఎండ, వేడి నుండి దూరంగా పొడి, చల్లని మరియు బాగా వెంటిలేషన్ ప్రదేశాలలో నిల్వ చేయాలి.

చెల్లింపు:టి / టి, పేపాల్, వెస్ట్రన్ యూనియన్, అలీబాబా ట్రేడ్ అస్యూరెన్స్, వీసా, మాస్టర్ కార్డ్, ఇ-చెకింగ్, తరువాత చెల్లించండి, ఎల్‌సి మరియు మొదలైనవి.