యాసిడ్ ప్రోటీజ్

అప్లికేషన్ మరియు సూత్రం

ఈ ఆమ్ల ప్రోటీజ్ టైరోసిన్ ప్రాతిపదికన (HUT) హిమోగ్లోబిన్ యూనిట్లుగా వ్యక్తీకరించబడిన ప్రోటీయోలైటిక్ కార్యకలాపాలను నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించబడుతుంది, ఆస్పెర్‌గిల్లస్ ఒరిజా వర్ మరియు ఆస్పెర్‌గిల్లస్ నైగర్ వర్ నుండి పొందిన సన్నాహాలు, మరియు పిహెచ్ 4.7 వద్ద ఇతర ప్రోటీజ్‌ల కార్యాచరణను నిర్ణయించడానికి దీనిని ఉపయోగించవచ్చు . పరీక్ష pH 4.7 మరియు 40 at వద్ద హిమోగ్లోబిన్ ఉపరితలం యొక్క 30-నిమిషాల ఎంజైమాటిక్ జలవిశ్లేషణపై ఆధారపడి ఉంటుంది. అన్‌హైడ్రోలైజ్డ్ సబ్‌స్ట్రేట్ ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ ఆమ్లంతో అవక్షేపించబడుతుంది మరియు వడపోత ద్వారా తొలగించబడుతుంది. ఫిల్ట్రేట్‌లోని కరిగే హిమోగ్లోబిన్ పరిమాణం స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్‌గా నిర్ణయించబడుతుంది.

యాసిడ్ ప్రోటీజ్ యొక్క కారకాలు మరియు పరిష్కారాలు
హిమోగ్లోబిన్ వాడకం హిమోగ్లోబిన్ సబ్‌స్ట్రేట్ పౌడర్ (సిగ్మా కెమికల్ కో., కాటలాగ్ నం. H2625) లేదా నీటిలో పూర్తిగా కరిగే ఇలాంటి హై-గ్రేడ్ పదార్థం.
ఎసిటేట్ బఫర్ సొల్యూషన్ 136 గ్రా సోడియం అసిటేట్ (NaC2H3O2 · 3H2O) ను 500 ఎంఎల్ చేయడానికి తగినంత నీటిలో కరిగించండి. ఈ ద్రావణంలో 25.0 ఎంఎల్‌ను 1 ఎం ఎసిటిక్ యాసిడ్‌లో 50.0 ఎంఎల్‌తో కలపండి, నీటితో 1000 ఎంఎల్‌కు పలుచన చేసి కలపాలి. ఈ ద్రావణం యొక్క pH 4.7 ± 0.02 ఉండాలి.
సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ 4.0 గ్రా హిమోగ్లోబిన్‌ను 250-ఎంఎల్ బీకర్‌గా బదిలీ చేసి, 100 ఎంఎల్ నీటిని వేసి, 10 నిమిషాలు కరిగించడానికి కదిలించు. పిహెచ్ మీటర్ యొక్క ఎలక్ట్రోడ్లను ద్రావణంలో ముంచండి, మరియు నిరంతరం గందరగోళాన్ని చేస్తున్నప్పుడు, 0.3 ఎన్ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లాన్ని జోడించడం ద్వారా పిహెచ్‌ను 1.7 కు సర్దుబాటు చేయండి. 10 నిమిషాల తరువాత, 0.5 M సోడియం అసిటేట్ జోడించడం ద్వారా pH ని 4.7 కు సర్దుబాటు చేయండి. ద్రావణాన్ని 200-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌లోకి బదిలీ చేయండి, నీటితో వాల్యూమ్‌తో కరిగించి, కలపాలి. శీతలీకరించినప్పుడు ఈ పరిష్కారం సుమారు 5 రోజులు స్థిరంగా ఉంటుంది.
ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ యాసిడ్ సొల్యూషన్ 140 గ్రా ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ ఆమ్లాన్ని 750 ఎంఎల్ నీటిలో కరిగించండి. ద్రావణాన్ని 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌కు బదిలీ చేయండి, నీటితో వాల్యూమ్‌తో కరిగించి, పూర్తిగా కలపాలి.

నమూనా తయారీ ప్రతి ఎమ్‌ఎల్‌లో 9 మరియు 22 హెచ్‌యుటి మధ్య ఉండే ఒక పరిష్కారాన్ని ఉత్పత్తి చేయడానికి ఎసిటేట్ బఫర్ సొల్యూషన్‌లోని నమూనా మొత్తాన్ని కరిగించండి. (అటువంటి ఏకాగ్రత 0.2 నుండి 0.5 వరకు ఇష్టపడే పరిధిలో, దిగువ విధానంలో, శోషక పఠనాన్ని ఉత్పత్తి చేస్తుంది.)

యాసిడ్ ప్రోటీజ్ యొక్క విధానం
25- × 150-మిమీ పరీక్షా గొట్టాల శ్రేణిలో సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ యొక్క పైపెట్ 10.0 ఎంఎల్: ప్రతి ఎంజైమ్ పరీక్షకు ఒకటి మరియు ఉపరితలం ఖాళీగా ఉంటుంది. గొట్టాలను నీటి స్నానంలో 40 at వద్ద 5 నిమిషాలు వేడి చేయండి. ప్రతి గొట్టానికి, ఉపరితల ఖాళీ తప్ప, నమూనా తయారీలో 2.0 ఎంఎల్‌ను జోడించి, పరిష్కారం జోడించిన క్షణంలో ప్రతిచర్య సమయాన్ని ప్రారంభించండి; ఎసిటేట్ బఫర్ సొల్యూషన్ యొక్క 2.0 ఎంఎల్‌ను సబ్‌స్ట్రేట్ ఖాళీ గొట్టానికి జోడించండి. నంబర్ 4 రబ్బరు స్టాపర్లతో గొట్టాలను మూసివేసి, కలపడానికి అరచేతికి వ్యతిరేకంగా ప్రతి గొట్టాన్ని 30 సెకన్ల పాటు శాంతముగా నొక్కండి. ప్రతి గొట్టాన్ని నీటి స్నానంలో 40 at వద్ద సరిగ్గా 30 నిమిషాలు వేడి చేసి, ఆపై ప్రతి గొట్టంలోకి 10.0 ఎంఎల్ ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ యాసిడ్ సొల్యూషన్‌ను వేగంగా పైప్ చేయండి. ప్రతి గొట్టాన్ని సుమారు 40 సెకన్ల పాటు స్టాపర్కు వ్యతిరేకంగా తీవ్రంగా కదిలించండి, ఆపై 1 గం వరకు గది ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబరచడానికి అనుమతించండి, ఈ కాలంలో ప్రతి గొట్టాన్ని 10- నుండి 12-నిమిషాల వ్యవధిలో స్టాపర్కు వ్యతిరేకంగా వణుకుతుంది. ఈ క్రింది విధంగా ఎంజైమ్ ఖాళీలను సిద్ధం చేయండి: వేడి, ప్రత్యేక గొట్టాలలో, సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్‌లో 10.0 ఎంఎల్ మరియు 30 నిమిషాల పాటు నీటి స్నానంలో 5 ఎంఎల్ మాదిరి తయారీ, ఆపై 10.0 ఎంఎల్ ట్రైక్లోరోఅసెటిక్ యాసిడ్ సొల్యూషన్‌ను సబ్‌స్ట్రేట్ సొల్యూషన్‌కు జోడించి, బాగా కదిలించండి 40 సెకన్ల కోసం, మరియు ఈ మిశ్రమానికి ముందుగా వేడిచేసిన నమూనా తయారీలో 2.0 ఎంఎల్ జోడించండి. మళ్ళీ కదిలించండి మరియు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 1 గం వరకు చల్లబరుస్తుంది, 10- నుండి 12-నిమిషాల వ్యవధిలో వణుకుతుంది.
1 గం చివరిలో, ప్రతి గొట్టాన్ని తీవ్రంగా కదిలించండి మరియు 11-సెం.మీ వాట్మాన్ నం 42, లేదా సమానమైన, ఫిల్టర్ పేపర్ ద్వారా ఫిల్టర్ చేయండి, ఫిల్ట్రేట్ యొక్క మొదటి సగం అదే కాగితం ద్వారా రీఫిల్టర్ చేస్తుంది. ప్రతి ఫిల్ట్రేట్ యొక్క శోషణను 1-సెం.మీ కణంలో, 275 ఎన్ఎమ్ వద్ద, తగిన స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌తో నిర్ణయించండి, వాయిద్యం సున్నాకి సెట్ చేయడానికి సబ్‌స్ట్రేట్ ఖాళీ నుండి ఫిల్ట్రేట్‌ను ఉపయోగించి. తగిన ఎంజైమ్ ఖాళీ పఠనాన్ని తీసివేయడం ద్వారా ప్రతి పఠనాన్ని సరిచేయండి మరియు AU గా పొందిన విలువను రికార్డ్ చేయండి.
[గమనిక: 0.2 మరియు 0.5 మధ్య సరిదిద్దబడిన శోషణ పఠనం పొందకపోతే, అవసరమైనంతవరకు ఎంజైమ్ తయారీని ఎక్కువ లేదా తక్కువ ఉపయోగించి పరీక్షను పునరావృతం చేయండి.]

స్టాండర్డ్ కర్వ్ 100.0 మి.గ్రా ఎల్-టైరోసిన్, క్రోమాటోగ్రాఫిక్-గ్రేడ్, లేదా సమానమైన (ఆల్డ్రిచ్ కెమికల్ కో.), గతంలో స్థిరమైన బరువుకు ఎండబెట్టి, 1000-ఎంఎల్ వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్‌కు బదిలీ చేయండి. 0.1 N హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లం యొక్క 60 mL లో కరిగించండి. ఎల్-టైరోసిన్ పూర్తిగా కరిగిపోయినప్పుడు, ద్రావణాన్ని నీటితో కరిగించి, పూర్తిగా కలపండి. ఈ ద్రావణంలో 1.0 mL లో 100 µg టైరోసిన్ ఉంటుంది. ఈ స్టాక్ ద్రావణం నుండి మరో మూడు పలుచనలను ఎంఎల్‌కు 75.0, 50.0, మరియు 25.0 µg టైరోసిన్ కలిగి ఉండండి. 0.006 N హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లానికి వ్యతిరేకంగా తగిన స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌పై 1-సెం.మీ కణంలో 275 nm వద్ద నాలుగు పరిష్కారాల శోషణను నిర్ణయించండి. టైరోసిన్ ఏకాగ్రతకు వ్యతిరేకంగా శోషణ ప్లాట్లు సిద్ధం చేయండి. టైరోసిన్ యొక్క µg కు శోషణ పరంగా వక్రత యొక్క వాలును నిర్ణయించండి. ఈ విలువను 1.10 ద్వారా గుణించి, AS గా రికార్డ్ చేయండి. సుమారు 0.0084 విలువను పొందాలి.

యాసిడ్ ప్రోటీజ్ యొక్క లెక్కింపు
ప్రోటీయోలైటిక్ యొక్క ఒక HUT యూనిట్ (యాసిడ్ ప్రోటీజ్) సూచించిన పరిస్థితులలో 1 నిమిషంలో, ఉత్పత్తి చేసే ఎంజైమ్ మొత్తంగా, 275 nm వద్ద శోషణం 0.006 N హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లంలో 1.10 µg / mL టైరోసిన్ కలిగిన ద్రావణానికి సమానం.
సమీకరణం ద్వారా అసలు ఎంజైమ్ తయారీ యొక్క గ్రాముకు HUT ను లెక్కించండి

HUT / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

దీనిలో 22 పరీక్ష పరిష్కారం యొక్క చివరి వాల్యూమ్; 30 ప్రతిచర్య సమయం, నిమిషంలో; మరియు W అనేది g లో, తీసుకున్న అసలు నమూనా యొక్క బరువు.

[గమనిక: జాగ్రత్తగా నియంత్రించబడిన మరియు ప్రామాణిక పరిస్థితులలో AS యొక్క విలువ 0.0084; ఈ విలువ ప్రామాణిక వక్రరేఖ నుండి పొందిన విలువకు బదులుగా సాధారణ పని కోసం ఉపయోగించబడుతుంది, కాని ప్రామాణిక వక్రరేఖ నుండి లెక్కించిన ఖచ్చితమైన విలువ మరింత ఖచ్చితమైన ఫలితాల కోసం మరియు సందేహాల సందర్భాల్లో ఉపయోగించబడాలి.]

విశ్లేషణ యొక్క సర్టిఫికెట్

ఉత్పత్తి పేరు	యాసిడ్ ప్రోటీజ్
ఇంకొక పేరు	ఎన్ / ఎ	మూలం దేశం	చైనా
జాతి	ఆస్పెర్‌గిల్లస్ ఓరిజా	తయారీ తేదీ	మే 13, 2019
బ్యాచ్ సంఖ్య	SP19050903	గడువు తేదీ	మే 12, 2021
ప్యాకేజీ	25 కిలోలు / బకెట్	పరిమాణం	100 కిలోలు
ప్రోటోకాల్	ప్రత్యేకతలు	ఫలితాలు	పద్ధతి
ఫిజికల్ & కెమికల్ అనాలిసిస్
వివరణ	బ్రౌన్ పౌడర్	వర్తిస్తుంది	దృశ్య
వాసన & రుచి	లక్షణ వాసన మరియు రుచి	వర్తిస్తుంది	రుచి
తేమ	NMT 7%	5.1%	తేమ విశ్లేషణకారి
ఐడెంటిఫికేషన్
గుర్తించదగిన కార్యాచరణ	బ్రోమెలైన్ కార్యాచరణకు అనుకూలమైనది	వర్తిస్తుంది	ఇంట్లో
కార్యాచరణ
ప్రోటీజ్ కార్యాచరణ	NLT 500,000 HUT / g	508,270 HUT / g	FCC VII
మైక్రోబయోలాజికల్
మొత్తం బ్యాక్టీరియా సంఖ్య కోలిఫాం బ్యాక్టీరియా (CFU / g) అచ్చులు మరియు ఈస్ట్‌లు ఇ.కోలి సాల్మొనెల్లా స్టాపైలాకోకస్ సూడోమోనాస్ ఏరుగినోసా	NMT 3,000 CFU / g NMT 30 CFU / g NMT 100 CFU / g లేకపోవడం లేకపోవడం లేకపోవడం లేకపోవడం	500 CFU / గ్రా 10 CFU / g 10 CFU / g కనిపెట్టబడలేదు కనిపెట్టబడలేదు కనిపెట్టబడలేదు కనిపెట్టబడలేదు	FDA BAM ఆన్‌లైన్ Ch.3 FDA BAM ఆన్‌లైన్ Ch.4 FDA BAM ఆన్‌లైన్ Ch. 2 FDA BAM ఆన్‌లైన్ Ch.4 FDA BAM ఆన్‌లైన్ Ch.5 FDA BAM ఆన్‌లైన్ Ch.12 AOAC
హెవీ మెటల్స్
లీడ్ బుధుడు కాడ్మియం ఆర్సెనిక్	NMT 3 ppm NMT 0.1 ppm NMT 1 ppm NMT 1 ppm	0.21 పిపిఎం ＜0.1 ppm 1 ppm Pp1ppm	USP <231> USP <231> USP <231> USP <231>
నిల్వ: కాంతి నుండి రక్షించబడిన చల్లని మరియు పొడి ప్రదేశంలో నిల్వ చేయండి, ఉపయోగంలో లేనప్పుడు డ్రమ్‌ను దగ్గరగా ఉంచండి. తీర్మానం: IU ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా ఉంటుంది. షెల్ఫ్ లైఫ్: సూచించిన నిల్వ పరిస్థితులలో యాసిడ్ ప్రోటీజ్ యొక్క షెల్ఫ్ లైఫ్ మరియు ఎయిర్-టైట్ ప్యాకింగ్ 2 సంవత్సరాలు ఉంటుంది. పైన పేర్కొన్న స్పెసిఫికేషన్లతో ఉత్పత్తి సరిపోతుంది రికీ H. ZHU అధీకృత సంతకం ఆమోదించింది

*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of యాసిడ్ ప్రోటీజ్. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

ప్యాకేజింగ్ మరియు నిల్వ

సాలిడ్ ఫుడ్ ప్యాకేజింగ్ బ్యాగ్, 25 కిలోలు / బ్యారెల్.

యాసిడ్ ప్రోటీజ్ ఎండ, వేడి నుండి దూరంగా పొడి, చల్లని మరియు బాగా వెంటిలేషన్ ప్రదేశాలలో నిల్వ చేయాలి.

చెల్లింపు:టి / టి, పేపాల్, వెస్ట్రన్ యూనియన్, అలీబాబా ట్రేడ్ అస్యూరెన్స్, వీసా, మాస్టర్ కార్డ్, ఇ-చెకింగ్, తరువాత చెల్లించండి, ఎల్‌సి మరియు మొదలైనవి.